Partículas Lentivirales de Activación (h) SIM1: sc-405931-LAC

SIM1 (single-minded family bHLH transcription factor 1) es un regulador transcripcional neuronal que forma heterodímeros con ARNT2 y se une a motivos tipo E-box para controlar programas génicos que gobiernan el desarrollo del hipotálamo, la especificación neuroendocrina y la homeostasis energética. Como parte de redes de señalización bHLH-PAS, SIM1 influye en circuitos transcripcionales vinculados a las vías de saciedad, los efectos de salida de la señalización melanocortínica y procesos más amplios de diferenciación y guía axonal en el sistema nervioso central. Las alteraciones en la dosis de SIM1 o las disrupciones de su regulación se han asociado con disfunción hipotalámica y fenotipos de obesidad grave, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudiar la regulación génica del neurodesarrollo y los mecanismos de enfermedad metabólica. Su expresión restringida y su papel regulador aguas arriba también respaldan su uso como marcador y como impulsor funcional en modelos de identidad de linaje neuronal y control endocrino.

Las partículas de activación lentiviral SIM1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SIM1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SIM1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SIM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SIM1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SIM1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.