Plasmide Double Nickase (h) Sil: sc-409193-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Sil correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Sil Double Nickase (h) et le plasmide Sil Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant STIL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Sil Antibody (A-6): sc-271910
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Sil | sc-409193-NIC | 20 µg | $410.00 |
STIL (SCL/TAL1 interrupting locus), également connu sous le nom de Sil, code une protéine centrosomale indispensable à la biogenèse des centrioles et à l’assemblage correct du fuseau mitotique. Il agit au sein de l’axe PLK4–STIL–SAS-6 pour initier la formation du procentriole, favorisant une ségrégation chromosomique fidèle et la progression du cycle cellulaire. En raison de ses fonctions dans la duplication du centrosome et dans des processus neurodéveloppementaux, une activité altérée de STIL est associée à une amplification des centrosomes, à des dérégulations de la prolifération et à des troubles du développement tels que la microcéphalie primaire. Ces caractéristiques font de STIL une cible couramment utilisée pour étudier l’homéostasie du centrosome, la fidélité mitotique et les relations génotype‑phénotype dans les cellules humaines en prolifération.
Sil Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus STIL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de STIL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de STIL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de STIL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.