Plasmide CRISPR d'Activation (h) Sigma Receptor: sc-400615-ACT

Le gène humain **SIGMAR1** code le **récepteur sigma 1** (Sigma Receptor), une chaperonne résidente du réticulum endoplasmique (RE) et associée aux membranes de contact RE–mitochondrie (MAM), qui module l’échange inter‑organites de Ca²⁺, l’homéostasie lipidique et la protéostase en situation de stress cellulaire. SIGMAR1 influence les sorties de signalisation issues du flux de Ca²⁺ dépendant d’IP3R, des voies de stress du RE/UPR et de la bioénergétique mitochondriale, façonnant ainsi la fonction synaptique, le maintien des neurites et les programmes de survie cellulaire. Par ses interactions avec des canaux ioniques, des composants de la signalisation des RCPG et des régulateurs redox, le récepteur sigma 1 intègre l’adaptation au stress à la neurotransmission et à la régulation métabolique. Le dérèglement des processus associés à SIGMAR1 a été lié à la neurodégénérescence et à des phénotypes neuropathiques, ce qui étaye son intérêt pour des études mécanistiques portant sur la défaillance de la protéostase et le dysfonctionnement mitochondrial.

Sigma Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIGMAR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Sigma Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIGMAR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIGMAR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Sigma Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIGMAR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Sigma Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Sigma Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de SIGMAR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.