Siglec-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406675-ACT

SIGLEC9 codifica a Siglec-9, uma lectina do tipo imunoglobulina que se liga ao ácido siálico, expressa predominantemente em neutrófilos, monócitos e em subpopulações de células NK, onde atua como um recetor inibitório que atenua a ativação celular. Por meio dos seus motivos ITIM citoplasmáticos, a Siglec-9 recruta fosfatases como SHP-1/SHP-2 para modular a sinalização a jusante de recetores imunitários, moldando processos que incluem a produção de citocinas, a desgranulação, a fagocitose e a explosão oxidativa. Ao reconhecer ligandos sialilados em células do hospedeiro ou alteradas, a Siglec-9 contribui para a homeostase imunitária e para a regulação da inflamação. A desregulação da sinalização da Siglec-9 tem sido implicada em supressão imunitária patológica e em contextos inflamatórios crónicos, sustentando o seu uso como marcador e como nó mecanístico em estudos de imunologia e de interação tumor–sistema imunitário.

Siglec-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIGLEC9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Siglec-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIGLEC9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIGLEC9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Siglec-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIGLEC9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Siglec-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Siglec-9 em células tumorais com expressão de SIGLEC9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.