Plasmide CRISPR/Cas9 KO shrew-1 (h): sc-406228

Présentation

AJAP1 code shrew-1, une protéine transmembranaire à passage unique impliquée dans les interactions cellule–cellule et cellule–matrice au niveau de la membrane plasmique ainsi que dans la polarité épithéliale. Les fonctions rapportées relient shrew-1 à la modulation de l’organisation du cytosquelette, du trafic membranaire et des voies de signalisation associées à l’adhérence, qui influencent la migration cellulaire et l’architecture tissulaire. En biologie humaine, une expression altérée d’AJAP1 a été associée à des changements du comportement invasif et au remodelage de la dynamique des jonctions d’adhérence, ce qui étaye son utilisation comme marqueur des transitions d’état d’adhérence. Ces caractéristiques rendent AJAP1/shrew-1 pertinent pour des études mécanistiques des réseaux suppresseurs de tumeurs, des phénotypes liés aux métastases et de la signalisation dépendante du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO shrew-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AJAP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AJAP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AJAP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine shrew-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AJAP1 pour l'étude de la signalisation de shrew-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AJAP1 essentiels à la fonction de shrew-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AJAP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le shrew-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le shrew-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AJAP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le shrew-1 plasmide HDR (h) et le shrew-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AJAP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AJAP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.