Plasmide CRISPR d'Activation (h) Shank 1: sc-403064-ACT

SHANK1 code Shank 1, une protéine d’échafaudage multidomaine enrichie dans la densité postsynaptique des synapses excitatrices, où elle organise des complexes de signalisation glutamatergique. En reliant les récepteurs et les canaux à des protéines régulatrices de l’actine et de la signalisation, Shank 1 soutient la formation des synapses, la morphologie des épines dendritiques et la plasticité synaptique dépendante de l’activité. SHANK1 participe à des voies qui gouvernent l’architecture postsynaptique et la neurotransmission, notamment des assemblages centrés sur les complexes des récepteurs NMDA/AMPA et des processus en aval impliquant de petites GTPases et le remodelage du cytosquelette. Des perturbations génétiques et fonctionnelles des protéines d’échafaudage de la famille SHANK sont associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, faisant de SHANK1 une cible pour des études mécanistiques du dysfonctionnement synaptique.

Shank 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SHANK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Shank 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SHANK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SHANK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Shank 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SHANK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Shank 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Shank 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SHANK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.