SGTA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404399-ACT

A SGTA humana (small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing protein alpha) é uma co-chaperona que se liga à HSP70/HSC70 e à HSP90 para coordenar o controlo de qualidade proteica e o processamento de proteínas clientes. A SGTA participa na triagem de polipeptídeos hidrofóbicos e de proteínas de membrana com âncora C-terminal (tail-anchored), influenciando o seu encaminhamento para vias de inserção na membrana ou para degradação pelo proteassoma, e interage funcionalmente com o eixo de direcionamento BAG6/GET. Por meio dessas interações, a SGTA ajuda a manter a proteostase, modula a maturação de recetores e proteínas de sinalização e afeta respostas celulares ao stresse, como a degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD). A desregulação de redes de chaperonas que incluem a SGTA tem sido associada a alterações na homeostase proteica em contextos relevantes para a biologia do cancro e para a neurodegeneração, o que sustenta o seu valor como um nó mecanístico para investigar vias.

SGTA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SGTA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SGTA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SGTA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SGTA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SGTA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SGTA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SGTA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SGTA em células tumorais com expressão de SGTA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.