Plásmido Doble Nickase (h) SF-1: sc-402334-NIC

NR5A1 codifica el factor esteroidogénico 1 (SF-1), un factor de transcripción huérfano de la familia de receptores nucleares que coordina el desarrollo suprarrenal y gonadal, así como la función diferenciada de las células esteroidogénicas. SF-1 regula genes implicados en la biosíntesis de hormonas esteroideas, el transporte de colesterol y la señalización del eje reproductor, integrando redes de receptores nucleares y programas de transcripción sensibles a cAMP/PKA. En la biología humana, las alteraciones de la actividad de NR5A1 se asocian con trastornos del desarrollo sexual, insuficiencia suprarrenal y esteroidogénesis desregulada, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar la especificación de linajes endocrinos y la expresión génica regulada por hormonas. Por ello, SF-1 se utiliza ampliamente como punto de entrada molecular para investigar el control transcripcional de las vías esteroidogénicas y las decisiones de destino del desarrollo en modelos celulares relevantes.

SF-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NR5A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NR5A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NR5A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NR5A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.