SETD4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403788-ACT

O SETD4 humano codifica uma proteína contendo domínio SET implicada na regulação, dependente de metilação de lisina, da estrutura da cromatina e de programas transcricionais. Como um potencial “writer” epigenético, o SETD4 é estudado no contexto do remodelamento da cromatina, do controle do ciclo celular e da expressão gênica associada a linhagens celulares, em que dinâmicas alteradas de metilação podem remodelar o estado celular. A desregulação da expressão ou da atividade de SETD4 tem sido investigada em relação a fenótipos de proliferação e à reprogramação transcricional relevantes para a biologia do câncer e outras doenças com perturbações epigenéticas. Essas características tornam o SETD4 um alvo útil para estudos mecanísticos que conectam a sinalização associada à cromatina a redes de regulação gênica.

SETD4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SETD4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SETD4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SETD4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SETD4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SETD4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SETD4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SETD4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SETD4 em células tumorais com expressão de SETD4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.