Serpinb3a Double Nickase Plasmid (m): sc-422808-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Serpinb3a Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Serpinb3a Double-Nickase-Plasmid (m) und Serpinb3a Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Serpinb3a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Serpinb3a Double Nickase Plasmid (m) | sc-422808-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Serpinb3a Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422808-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Serpinb3a kodiert einen Serinprotease-Inhibitor (Serpin) der Maus aus der Clade B, der an der Regulation der intrazellulären Proteolyse, der Homöostase epithelialer Zellen und stressresponsiver Signalwege beteiligt ist. Durch die Modulation der Proteaseaktivität und der Proteostase kann Serpinb3a Entzündungskaskaden, die Anfälligkeit für Apoptose und Prozesse des Gewebeumbaus beeinflussen. Veränderte Serpin-Expressionsmuster werden häufig im Zusammenhang mit epithelialen Schädigungen, fibroseassoziiertem Remodeling und Interaktionen zwischen Immunzellen und Epithel untersucht, wobei das Protease–Antiprotease-Gleichgewicht die Barriereintegrität und zytokingetriebene Antworten prägt. Als funktionelles Analogon zur Biologie von humanem SERPINB3/B4 ist Serpinb3a relevant für mechanistische Studien in Mausmodellen, die Proteasehemmung mit Entzündung, oxidativem Stress und karzinogeneseassoziierten Mikroumgebungen verknüpfen.
Serpinb3a Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Serpinb3a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Serpinb3a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Serpinb3a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Serpinb3a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.