Plásmido Doble Nickase (h) SerpinB1: sc-402083-NIC

SERPINB1 codifica SerpinB1, un inhibidor intracelular de proteasas de serina que restringe proteasas derivadas de neutrófilos como la elastasa y la catepsina G, limitando así el estrés proteolítico y favoreciendo la homeostasis tisular. SerpinB1 contribuye a la regulación de la señalización inflamatoria, la supervivencia de los leucocitos y la integridad de la barrera epitelial al modular vías impulsadas por proteasas relacionadas con el estrés oxidativo y la muerte celular. Las alteraciones en la expresión o la función de SERPINB1 se han asociado con respuestas inmunitarias innatas desreguladas y con un desequilibrio de proteasas en contextos inflamatorios de vías respiratorias y piel, y también se utiliza como marcador en estudios sobre estados de células mieloides. Estas características hacen de SERPINB1 una diana útil para desentrañar redes de proteasa-inhibidor, la biología de los neutrófilos y los mecanismos de remodelación asociados a la inflamación en modelos celulares humanos.

SerpinB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SERPINB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SERPINB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SERPINB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SERPINB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.