Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA5B (m): sc-422886

Présentation

Sema5b code pour la molécule de guidage transmembranaire SEMA5B, membre de la famille des sémaphorines, qui régule la signalisation dépendante du contact au cours du développement neural et de l’assemblage des circuits synaptiques. SEMA5B influence le guidage axonal, l’arborisation dendritique et la croissance des neurites via des voies impliquant des récepteurs plexines et un remodelage cytosquelettique en aval. Dans des modèles murins, une activité altérée de Sema5b a été associée à des modifications de la connectivité et de la plasticité neuronales, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude des mécanismes des maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques. Son expression dans le système nerveux en fait également un point d’entrée utile pour analyser les programmes de communication cellule–cellule qui façonnent l’organisation des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA5B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema5b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema5b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema5b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA5B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema5b pour l'étude de la signalisation de SEMA5B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema5b essentiels à la fonction de SEMA5B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema5b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA5B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema5b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA5B plasmide HDR (m) et le SEMA5B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema5b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema5b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.