SEMA4C Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422882

Descripción general

Sema4c codifica la semaforina-4C (SEMA4C), una molécula transmembrana de guiado que señaliza a través de receptores plexina para regular la comunicación célula–célula, la migración direccional y la remodelación del citoesqueleto. En tejidos de ratón, SEMA4C contribuye a eventos de señalización dependientes del contacto que moldean el patrón neural e influyen en las interacciones de células inmunitarias, vinculando las vías de semaforinas con procesos del desarrollo e inflamatorios. Los efectos posteriores suelen converger en la regulación de las GTPasas de la familia Rho y en programas asociados a MAPK que coordinan la dinámica de adhesión y la motilidad. La alteración de la señalización semaforina–plexina se ha asociado con una remodelación tisular desregulada y cambios en el microambiente inmunitario, lo que respalda su estudio en modelos relevantes para la enfermedad sin implicar resultados terapéuticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEMA4C (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sema4c en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sema4c junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sema4c tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEMA4C.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sema4c para la investigación de la señalización de SEMA4C, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sema4c críticos para la función de SEMA4C
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sema4c para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEMA4C CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEMA4C CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sema4c. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEMA4C (m) y el plásmido HDR SEMA4C (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sema4c para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sema4c definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.