Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4B (m): sc-422881

Présentation

Sema4b code l’indice de guidage transmembranaire SEMA4B, une sémaphorine de classe 4 qui participe à une signalisation dépendante du contact pour réguler l’adhérence cellulaire, la migration et le remodelage du cytosquelette. Dans les tissus murins, SEMA4B contribue au guidage axonal et à l’organisation synaptique, et a été impliquée dans les réponses gliales et neuronales à des signaux liés à l’inflammation et aux lésions. La signalisation des sémaphorines croise des voies qui contrôlent les GTPases de la famille Rho ainsi que des cascades de kinases associées aux récepteurs, modulant la motilité directionnelle et l’organisation des tissus. Des réseaux de sémaphorines dérégulés, notamment la signalisation associée à SEMA4B, sont étudiés dans des contextes de perturbations du neurodéveloppement, de neuroinflammation et d’interactions tumeur–microenvironnement, où les signaux de guidage influencent l’invasion et le positionnement des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA4B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema4b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema4b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema4b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA4B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema4b pour l'étude de la signalisation de SEMA4B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema4b essentiels à la fonction de SEMA4B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema4b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA4B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA4B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema4b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA4B plasmide HDR (m) et le SEMA4B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema4b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema4b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.