Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA3E (m): sc-422878

Présentation

Le gène murin Sema3e code la sémaphorine‑3E (SEMA3E), un facteur de guidage sécrété qui signale principalement via des récepteurs de type plexine afin de contrôler l’orientation des axones, la migration neuronale et la mise en place des tissus. SEMA3E module la dynamique du cytosquelette et l’adhérence cellulaire, en interagissant, de manière contextuelle, avec des voies qui régulent la motilité, le remodelage angiogénique et le trafic des cellules immunitaires. Une dérégulation de la signalisation SEMA3E–plexine a été associée dans la littérature à un développement vasculaire anormal et à des modifications du comportement invasif dans des modèles de biologie du cancer, ce qui souligne sa pertinence pour les études du neurodéveloppement et de la signalisation du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA3E (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sema3e dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sema3e, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sema3e à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA3E.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sema3e pour l'étude de la signalisation de SEMA3E, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sema3e essentiels à la fonction de SEMA3E
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sema3e pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA3E plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SEMA3E plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sema3e. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA3E plasmide HDR (m) et le SEMA3E (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sema3e pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sema3e définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.