Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec8 (m): sc-422866

Présentation

Exoc4 code pour Sec8, une sous-unité essentielle du complexe exocyste octamérique, qui assure l’arrimage des vésicules de sécrétion à des sites définis de la membrane plasmique avant la fusion dépendante des SNARE. Dans les cellules de souris, Sec8 contribue à coordonner l’exocytose polarisée et le trafic membranaire qui soutiennent des processus tels que la polarité épithéliale, l’extension des neurites, la cytocinèse et le recyclage des récepteurs, en intégrant des signaux émanant de petites GTPases, notamment Ral, Rab et Cdc42. La fonction de l’exocyste est étroitement liée au remodelage du cytosquelette et à la migration cellulaire dirigée, ce qui fait de Sec8 un point d’entrée utile pour étudier les voies qui régissent l’organisation tissulaire et la fidélité du transport intracellulaire. Une dérégulation du trafic dépendant de l’exocyste a été associée à des altérations de la polarité cellulaire et à des dynamiques de signalisation aberrantes pertinentes pour la recherche en biologie du développement et en neurobiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Exoc4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Exoc4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Exoc4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sec8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Exoc4 pour l'étude de la signalisation de Sec8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Exoc4 essentiels à la fonction de Sec8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Exoc4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sec8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sec8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Exoc4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sec8 plasmide HDR (m) et le Sec8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Exoc4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Exoc4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.