Plásmido Doble Nickase (h) SEC16L: sc-411387-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SEC16L consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SEC16L (h) y el plásmido de doble nickasa SEC16L (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SEC16A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SEC16L | sc-411387-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SEC16L | sc-411387-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SEC16A codifica SEC16L, un andamiaje periférico asociado a membrana que organiza los sitios de salida del retículo endoplásmico (RE) y coordina el ensamblaje de la cubierta COPII durante el transporte del RE al aparato de Golgi. Al regular el reclutamiento y el recambio de los componentes de COPII, SEC16L ayuda a controlar el flujo secretor, el tráfico de membranas y la homeostasis de los orgánulos, con efectos posteriores sobre la proteostasis y la adaptación celular al estrés. La alteración de la función de la vía secretora temprana puede influir en el tráfico de receptores de señalización y en la regulación metabólica, y la desregulación de SEC16A/SEC16L se ha investigado en contextos en los que el estrés del RE, la secreción y la dinámica de membranas contribuyen a fenotipos relevantes para la enfermedad. En consecuencia, SEC16L es una diana útil para estudiar cómo la exportación desde el RE se relaciona con la autofagia, la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas y el control del estado celular dependiente del tráfico.
SEC16L El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SEC16A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SEC16A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SEC16A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SEC16A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.