Plásmido Doble Nickase (m) SDF-1/CXCL12: sc-422854-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)SDF-1/CXCL12 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SDF-1/CXCL12 (m) y el plásmido de doble nickasa SDF-1/CXCL12 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cxcl12. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SDF-1/CXCL12 Anticuerpo (P-159X): sc-74271
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) SDF-1/CXCL12 | sc-422854-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) SDF-1/CXCL12 | sc-422854-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Cxcl12 de ratón codifica la quimiocina SDF-1/CXCL12, un regulador clave de la migración celular dirigida y de la organización tisular a través de sus receptores CXCR4 y ACKR3 (CXCR7). La señalización de SDF-1/CXCL12 activa vías downstream que incluyen PI3K–AKT, MAPK/ERK y JAK/STAT para controlar la quimiotaxis, la supervivencia y la adhesión en los compartimentos hematopoyético, endotelial y estromal. Es fundamental para el homing y la retención de células madre y progenitoras hematopoyéticas en nichos de médula ósea, así como para el desarrollo vascular y el tráfico de leucocitos. La desregulación de los gradientes de CXCL12 y de la señalización de sus receptores se estudia ampliamente en modelos de inflamación, fibrosis, interacciones tumor–estroma y diseminación metastásica.
SDF-1/CXCL12 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cxcl12 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cxcl12. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cxcl12. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cxcl12 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.