SCUBE2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410079-ACT

SCUBE2 (peptídeo sinal, domínio CUB, domínio semelhante a EGF contendo 2) codifica uma glicoproteína secretada associada à superfície celular que modula a sinalização extracelular e a comunicação célula–célula. Por meio de seus domínios CUB e semelhantes a EGF, a SCUBE2 está implicada na regulação da disponibilidade de fatores de crescimento e da dinâmica de sinalização de receptores, com conexões relatadas a programas de desenvolvimento e a comportamentos de células endoteliais ou epiteliais. A expressão alterada de SCUBE2 tem sido associada a proliferação, migração e diferenciação desreguladas em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo biologia do câncer e remodelamento vascular. Como um regulador extracelular ligado a vias, a SCUBE2 é frequentemente estudada por seu impacto em redes de sinalização que moldam a organização tecidual e as interações no microambiente tumoral.

SCUBE2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCUBE2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SCUBE2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCUBE2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCUBE2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SCUBE2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCUBE2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SCUBE2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SCUBE2 em células tumorais com expressão de SCUBE2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.