Plásmido CRISPR de Activación (h) SCUBE2: sc-410079-ACT

SCUBE2 (péptido señal, dominio CUB, dominio similar a EGF 2) codifica una glicoproteína secretada asociada a la superficie celular que modula la señalización extracelular y la comunicación célula–célula. A través de sus dominios CUB y similares a EGF, SCUBE2 participa en la regulación de la disponibilidad de factores de crecimiento y de la dinámica de señalización de receptores, con conexiones descritas con programas del desarrollo y con comportamientos de células endoteliales o epiteliales. La expresión alterada de SCUBE2 se ha asociado con proliferación, migración y diferenciación desreguladas en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, incluyendo la biología del cáncer y la remodelación vascular. Como regulador extracelular vinculado a vías de señalización, SCUBE2 se estudia con frecuencia por su impacto en redes de señalización que dan forma a la organización tisular y a las interacciones del microambiente tumoral.

SCUBE2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SCUBE2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SCUBE2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SCUBE2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SCUBE2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SCUBE2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SCUBE2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SCUBE2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SCUBE2 en células tumorales con expresión de SCUBE2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.