SCRG1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411605-ACT

SCRG1 (scrapie responsive gene 1) kodiert ein kleines, sezerniertes Glykoprotein, das an der interzellulären Signalübertragung und an der Regulation zellulärer Differenzierungsprogramme beteiligt ist. In menschlichen Geweben und Modellsystemen wurde SCRG1 mit der Biologie mesenchymaler und neuronaler Linien in Verbindung gebracht; beschrieben wurden Funktionen bei der Modulation zytokinähnlicher Kommunikation, extrazellulärmatrix-assoziierter Prozesse und von Zellzustandsübergängen. Eine veränderte SCRG1-Expression wurde in Zusammenhängen von Entzündung, Gewebeumbau und onkogenen Phänotypen beobachtet, was das Gen für mechanistische Studien zur mikroumgebungsgetriebenen Signalgebung relevant macht. Diese Eigenschaften sprechen dafür, SCRG1 als Ziel zu nutzen, um Signalwege zu untersuchen, die Differenzierung, Migration und transkriptionelle Reprogrammierung steuern.

SCRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCRG1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SCRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCRG1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCRG1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SCRG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCRG1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SCRG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SCRG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCRG1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.