Partículas Lentivirales de Activación (m) Scleraxis: sc-422833-LAC

El gen **Scx** de ratón codifica **escleraxis**, un factor de transcripción básico hélice–bucle–hélice que actúa como determinante de linaje para los fibroblastos de tendones y ligamentos y regula programas génicos de la matriz extracelular, incluidos los colágenos fibrilares y los proteoglucanos. La escleraxis integra la mecanotransducción y la señalización de **TGF-β/BMP** para controlar la diferenciación de los tenocitos, la remodelación de la matriz y la maduración tisular durante el desarrollo y la reparación. La actividad alterada de **Scx** se asocia con la disrupción de la homeostasis del tendón, una formación deficiente de la entesis y procesos de remodelación fibrótica relevantes para la degeneración musculoesquelética y una arquitectura anómala del tejido conectivo. Como regulador transcripcional de la organización de la MEC, la escleraxis se estudia ampliamente en modelos de lesión tendinosa, fibrosis y especificación del destino de células estromales.

Las partículas de activación lentiviral Scleraxis (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Scx en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Scleraxis (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Scx, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Scleraxis. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Scx y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.