SCD5 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-402860-LAC-2

A SCD5 humana (estearoil‑CoA dessaturase 5) codifica uma dessaturase Δ9 associada ao retículo endoplasmático que introduz uma dupla ligação cis em acil‑CoAs de ácidos graxos saturados, gerando ácidos graxos monoinsaturados que moldam a composição de membranas, a biologia de gotículas lipídicas e a biossíntese de fosfolipídios e triacilgliceróis. Ao regular a razão entre ácidos graxos saturados e monoinsaturados, a SCD5 influencia a homeostase lipídica celular e vias de sinalização metabólica ligadas às respostas ao estresse do RE e ao equilíbrio redox. A desregulação da expressão de SCD5 tem sido implicada em alterações do metabolismo lipídico observadas em distúrbios metabólicos e nos fenótipos moleculares de diversos cânceres, nos quais mudanças na dessaturação podem afetar programas de proliferação e diferenciação. A edição gênica de SCD5 em modelos celulares humanos possibilita estudos mecanísticos da dessaturação de ácidos graxos, da remodelagem lipidômica e das respostas, em nível de vias, a perturbações na saturação de lipídios de membrana.

As Partículas de Ativação Lentivirais SCD5 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SCD5 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SCD5 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SCD5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SCD5. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SCD5 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.