Partículas Lentivirales de Activación (h2) SCD5: sc-402860-LAC-2

La SCD5 humana (estearoil‑CoA desaturasa 5) codifica una desaturasa Δ9 asociada al retículo endoplásmico que introduce un doble enlace cis en acil‑CoA de ácidos grasos saturados, generando ácidos grasos monoinsaturados que determinan la composición de las membranas, la biología de las gotas lipídicas y la biosíntesis de fosfolípidos y triacilglicéridos; al regular la proporción de ácidos grasos saturados frente a monoinsaturados, SCD5 influye en la homeostasis lipídica celular y en vías de señalización metabólica vinculadas a las respuestas de estrés del retículo endoplásmico y al equilibrio redox; la expresión desregulada de SCD5 se ha implicado en alteraciones del metabolismo lipídico observadas en trastornos metabólicos y en los fenotipos moleculares de varios cánceres, donde los cambios en la desaturación pueden afectar programas de proliferación y diferenciación; la edición génica de SCD5 en modelos celulares humanos permite realizar estudios mecanísticos sobre la desaturación de ácidos grasos, la remodelación lipidómica y las respuestas a nivel de vías ante perturbaciones de la saturación lipídica de la membrana.

Las partículas de activación lentiviral SCD5 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SCD5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SCD5 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SCD5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SCD5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SCD5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.