Sc1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-420099-LAC

Mouse Sparcl1 kodiert Sc1 (SPARC-like 1), ein sezerniertes matrizelluläres Glykoprotein, das die Organisation der extrazellulären Matrix sowie Zell–Matrix-Interaktionen moduliert. Sc1 ist an der Regulation von Zelladhäsion, Migration und Gewebeumbau beteiligt, indem es extrazelluläre Signale vermittelt, die die Zytoskelettdynamik und das Verhalten stromaler Zellen beeinflussen. Die Sparcl1-Expression ist häufig mit vaskulären und stromalen Kompartimenten assoziiert und wird in Zusammenhängen wie Angiogenese, Wundheilung sowie der von Fibroblasten und Endothel gesteuerten Regulation des Mikromilieus untersucht. Eine dysregulierte Sparcl1/Sc1-Aktivität wurde mit pathologischem Remodeling und veränderten Tumor–Stroma-Interaktionen in Verbindung gebracht und ist damit relevant für mechanistische Studien zur matrixvermittelten Kontrolle des zellulären Phänotyps.

Sc1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Sparcl1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Sc1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Sparcl1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Sc1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Sparcl1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.