Sc1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420099
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Sc1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Sc1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SPARCL1 Anticuerpo (G-5): sc-514275
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Sc1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420099 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino Sparcl1 codifica Sc1, una glicoproteína matricelular secretada de la familia SPARC que modula la organización de la matriz extracelular y la adhesión célula–matriz. Sc1 contribuye a la regulación de la migración, proliferación y diferenciación celular al influir en la señalización de integrinas, la dinámica de las adhesiones focales y los programas de remodelación tisular. En contextos vasculares y estromales, SPARCL1 se asocia con la regulación de la angiogénesis y con las interacciones endotelio–músculo liso, y se han descrito cambios en su expresión en fibrosis, remodelación asociada a inflamación y en la biología del microambiente tumoral. Estas propiedades hacen de Sparcl1 una diana útil para estudiar redes de señalización dependientes de la MEC que modelan la arquitectura tisular y fenotipos estromales relevantes para la enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sc1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sparcl1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sparcl1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sparcl1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sc1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sparcl1 para la investigación de la señalización de Sc1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Sparcl1 críticos para la función de Sc1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sparcl1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Sc1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sc1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sparcl1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sc1 (m) y el plásmido HDR Sc1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sparcl1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sparcl1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.