Plasmide CRISPR/Cas9 KO SARP3 (m): sc-424898
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- SARP3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique SARP3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SARP3 Antibody (H-6): sc-374397
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO SARP3 (m) | sc-424898 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Sfrp5 code pour SARP3, une protéine sécrétée apparentée à Frizzled qui module la disponibilité extracellulaire des ligands Wnt et ajuste finement la signalisation Wnt/β-caténine ainsi que les voies Wnt non canoniques. En façonnant les interactions récepteur–ligand à la surface cellulaire, SARP3 influence la spécification du destin cellulaire, la prolifération et le remodelage tissulaire au cours du développement et dans l’homéostasie de l’adulte. Dans des modèles murins, une activité altérée de Sfrp5 a été associée à une biologie du tissu adipeux dérégulée, à l’inflammation et à des phénotypes métaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la sensibilité à l’insuline et de l’équilibre énergétique. Sa nature sécrétée place également SARP3 comme un nœud clé de la signalisation paracrine au sein des microenvironnements stroma–immunité–épithélium.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SARP3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sfrp5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sfrp5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sfrp5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SARP3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sfrp5 pour l'étude de la signalisation de SARP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Sfrp5 essentiels à la fonction de SARP3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sfrp5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le SARP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SARP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sfrp5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le SARP3 plasmide HDR (m) et le SARP3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sfrp5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sfrp5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.