Sam 68 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422795

Panoramica

Khdrbs1 codifica la proteina legante l’RNA Sam 68 (KHDRBS1), un regolatore della famiglia STAR dell’espressione genica post-trascrizionale che collega la trasduzione del segnale al metabolismo dell’RNA. Sam 68 si lega a specifici elementi dell’RNA per controllare lo splicing alternativo, l’esportazione dell’mRNA, la stabilità e la traduzione, e partecipa a complessi ribonucleoproteici dinamici, incluse vie associate ai granuli di stress. Attraverso interazioni dipendenti dalla fosforilazione con chinasi della famiglia Src e altri nodi di segnalazione, Sam 68 influenza la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e i programmi di differenziamento. La disregolazione dello splicing e del processamento dell’RNA mediati da KHDRBS1/Sam 68 è stata collegata alla segnalazione oncogenica, a fenotipi del neurosviluppo e a stati trascrizionali legati al sistema immunitario, a supporto della sua ampia utilità negli studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sam 68 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Khdrbs1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Khdrbs1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Khdrbs1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sam 68.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Khdrbs1 per lo studio della segnalazione di Sam 68, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Khdrbs1 critici per la funzione di Sam 68
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Khdrbs1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sam 68 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sam 68 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Khdrbs1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sam 68 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sam 68 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Khdrbs1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Khdrbs1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.