Sall4 Double Nickase Plasmid (h): sc-401033-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Sall4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Sall4 Double-Nickase-Plasmid (h) und Sall4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SALL4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Sall4: sc-166033
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Sall4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401033-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sall4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401033-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SALL4 kodiert Sall4, einen C2H2-Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der zur Aufrechterhaltung der Pluripotenz beiträgt und frühe Entwicklungsprogramme der Genexpression reguliert, einschließlich Netzwerken, die Selbsterneuerung, Linienfestlegung und den Chromatinzustand steuern. Sall4 koordiniert Transkriptionsschaltkreise mit Faktoren wie OCT4 und NANOG und interagiert mit epigenetischen Regulatoren, um während der Embryogenese die Aktivität von Enhancern und Promotoren zu formen. In somatischen Kontexten ist eine fehlregulierte SALL4-Expression mit veränderter Differenzierung und proliferativen Signalwegen verknüpft und wurde in mehreren Malignomen beschrieben, was SALL4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung onkogener Transkriptions-Umschaltungen macht. Die genetische Perturbation von SALL4 ermöglicht mechanistische Untersuchungen der Stammzellbiologie, von Zellschicksalsübergängen und von durch Transkriptionsfaktoren getriebenen genregulatorischen Netzwerken.
Sall4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SALL4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SALL4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SALL4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SALL4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.