SAF-B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403795-ACT

SAFB (SAF-B, Scaffold-Attachment-Factor B) ist ein mit der nukleären Matrix assoziiertes DNA- und RNA-bindendes Protein, das die Chromatinorganisation mit der transkriptionellen Kontrolle und der prä‑mRNA‑Prozessierung koordiniert. Es interagiert mit Scaffold-/Matrix-Anheftungsregionen und reguliert Genexpressionsprogramme, die mit der Aktivität der RNA-Polymerase II, alternativem Spleißen und stressresponsiver Transkription verknüpft sind. SAF-B wurde in die Signalübertragung von Hormonrezeptoren eingebunden, insbesondere in östrogenrezeptorassoziierte Regulationsnetzwerke, und trägt zur Aufrechterhaltung der Genomfunktion bei, indem es die Kernarchitektur mit dem RNA-Stoffwechsel koppelt. Eine Fehlregulation der SAFB-Expression oder -Funktion wurde mit veränderten Transkriptionszuständen in krebsassoziierten Signalwegen und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit aberranter Genregulation einhergehen.

SAF-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SAFB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SAF-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SAFB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SAFB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SAF-B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SAFB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SAF-B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SAF-B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SAFB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.