S-100P CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404366-ACT

Human S100P kodiert S-100P, ein kleines EF-Hand-Calcium-bindendes Protein, das als Signaladapter fungiert und Calciumflüsse mit Veränderungen der Zytoskelettdynamik, der Zellzykluskontrolle und stressresponsiven Transkriptionsprogrammen verknüpft. Berichten zufolge interagiert S-100P mit Rezeptoren und Signal-Hubs wie RAGE und beeinflusst dadurch MAPK- und NF-κB-assoziierte Signalwege, die Adhäsion, Migration und Überlebensphänotypen modulieren. Eine dysregulierte S100P-Expression wurde in mehreren epithelialen Malignomen beobachtet und wird häufig als Marker für Tumorprogression und metastatisches Potenzial untersucht. Darüber hinaus ist die Biologie von S-100P für entzündungsassoziiertes Gewebe-Remodelling relevant, bei dem calciumabhängige Signalgebung mit extrazellulärer Matrix und Immunreizen zusammenwirkt.

S-100P Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S100P-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

S-100P Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S100P-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S100P-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen S-100P-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S100P-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von S-100P-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des S-100P-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S100P-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.