S-100A10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402230-ACT

S100A10 kodiert S-100A10 (p11), ein Ca2+-bindendes Mitglied der S100-Familie, das an der Plasmamembran und in endosomalen Kompartimenten mit Annexin A2 einen funktionellen Heterotetramer bildet. Dieser Komplex koordiniert die Aktivierung von Plasminogen und die perizelluläre Proteolyse und beeinflusst dadurch den Umbau der extrazellulären Matrix, die Zelladhäsion und die gerichtete Migration über zytoskelettale und membrantransportbezogene Prozesse. S-100A10 ist außerdem an entzündlichen Signalwegen und Stressantwort-Pathways beteiligt, indem es die Rezeptorlokalisierung und Proteasenetzwerke an der Zelloberfläche moduliert. Eine dysregulierte S100A10-Expression wurde in mehreren Krankheitskontexten beschrieben, darunter krebsassoziierte Invasion und Metastasierung, vaskuläres und fibrotisches Remodeling sowie neuroinflammatorische Phänotypen, was seinen Nutzen als mechanistisches Ziel in pathway-orientierter Forschung unterstreicht.

S-100A10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S100A10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

S-100A10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S100A10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S100A10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen S-100A10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S100A10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von S-100A10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des S-100A10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S100A10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.