S-100 β chain Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400707-ACT

S100B codifica a cadeia S-100β, um membro da família de proteínas S100 com ligação a Ca2+ que funciona como um hub de sinalização ao modular a fosforilação de proteínas, a atividade enzimática e a dinâmica do citoesqueleto. No sistema nervoso central, é enriquecida em astrócitos e pode influenciar programas de suporte neuronal, a homeostase do cálcio e estados transcricionais responsivos ao estresse. A S-100β interage com proteínas regulatórias essenciais, moldando processos como progressão do ciclo celular, diferenciação, migração e sinalização inflamatória. A expressão desregulada de S100B é frequentemente usada como correlato molecular de neuroinflamação e gliose e tem sido associada a paisagens de sinalização alteradas em doenças neurológicas e em fenótipos relacionados ao câncer.

S-100 β chain O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

S-100 β chain O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de S-100 β chain. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de S-100 β chain no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via S-100 β chain em células tumorais com expressão de S100B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.