RTP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426736

Übersicht

Rezeptor-Transporter-Protein 4 (RTP4) ist ein Mitglied der RTP-Familie, die an intrazellulärem Transport und der funktionellen Expression ausgewählter G‑Protein-gekoppelter Rezeptoren (GPCRs) beteiligt ist und dadurch die Rezeptorreifung, Membranlokalisation und Signalantwort beeinflusst. In der Maus ist die Rtp4-Expression häufig mit Interferon-stimulierten Genprogrammen und der angeborenen Immun-Signalgebung assoziiert, was auf eine Rolle bei der Regulation antiviraler Antworten und inflammatorischer transkriptioneller Zustände hinweist. Über Effekte auf die Rezeptorprozessierung und immunassoziierte Signalwege kann RTP4 zelluläre Reaktionen auf extrazelluläre Reize und Zytokinumgebungen mitprägen. Eine Fehlregulation von RTP4-abhängiger Signalgebung und die Aktivierung von Interferon-Signalwegen werden häufig in Kontexten wie neuroimmunen Interaktionen, Infektionsmodellen und entzündungsassoziierten Phänotypen untersucht.

Das RTP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rtp4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rtp4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rtp4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RTP4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rtp4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RTP4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rtp4-Exone abzielen, die für die RTP4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rtp4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RTP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RTP4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rtp4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RTP4 HDR-Plasmid (m) und RTP4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rtp4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rtp4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.