Plasmide CRISPR/Cas9 KO RSP3 (h): sc-413513

Présentation

RSPH3 code pour le radial spoke head 3 homolog (RSP3), un composant structural du complexe des rayons radiaires dans les cils et flagelles mobiles, qui contribue à coupler l’activité des dynéines axonémales au glissement coordonné des microtubules et à la régulation du battement ciliaire. Par son rôle au sein de l’architecture axonémale 9+2, RSP3 favorise la génération correcte de la forme d’onde et une clairance mucociliaire efficace. Une perturbation de l’assemblage ou de la signalisation des rayons radiaires est associée aux ciliopathies motiles, dont des phénotypes de dyskinésie ciliaire primitive caractérisés par une motilité ciliaire altérée. En conséquence, RSPH3 est largement étudié dans les voies impliquées dans la biogenèse des cils, l’organisation axonémale et la physiologie des voies respiratoires et de l’appareil reproducteur.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RSP3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RSPH3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RSPH3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RSPH3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RSP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RSPH3 pour l'étude de la signalisation de RSP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RSPH3 essentiels à la fonction de RSP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RSPH3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RSP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RSP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RSPH3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RSP3 plasmide HDR (h) et le RSP3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RSPH3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RSPH3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.