Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rsk-4: sc-402383-ACT

RPS6KA6 code la kinase ribosomique S6 A6 (Rsk-4), une kinase sérine/thréonine agissant en aval de la signalisation MAPK/ERK pour moduler des programmes de phosphorylation qui contrôlent la transcription, la progression du cycle cellulaire et l’expression de gènes impliqués dans la réponse au stress. En tant que membre de la famille p90RSK, Rsk-4 intègre des signaux mitogènes et environnementaux afin d’influencer des sorties régulées par la chromatine et un remodelage protéomique plus large via la phosphorylation de substrats. Des altérations de l’activité ou de l’expression de RPS6KA6 ont été étudiées dans des contextes où l’architecture de la voie MAPK est perturbée, notamment dans des travaux sur la signalisation oncogénique, la différenciation cellulaire et la régulation de l’apoptose. Ces caractéristiques font de Rsk-4 un nœud utile pour la dissection mécanistique de la transduction du signal et des phénotypes dépendants des kinases dans des modèles cellulaires humains.

Rsk-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPS6KA6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rsk-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPS6KA6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPS6KA6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rsk-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPS6KA6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rsk-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rsk-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPS6KA6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.