RoXaN Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422830

Descripción general

Zc3h7b codifica RoXaN, una proteína que contiene dedos de zinc implicada en el metabolismo del ARN y la regulación posranscripcional, con funciones descritas en la coordinación de complejos ribonucleoproteicos que influyen en la estabilidad y la traducción del ARNm. A través de estas actividades, RoXaN puede afectar programas celulares relacionados con la proliferación, las respuestas al estrés y la diferenciación, al modular a nivel de transcrito la expresión de componentes de distintas vías. La regulación alterada de factores de unión a ARN y de proteínas con dedos de zinc se asocia con frecuencia con un control del crecimiento desregulado y con fenotipos inmunitarios o del neurodesarrollo, lo que convierte a Zc3h7b en un locus útil para estudios mecanísticos del control de la expresión génica. En sistemas de ratón, la perturbación de Zc3h7b permite investigar cómo las redes reguladoras de ARN se interconectan con la señalización y las transiciones de estado celular en contextos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RoXaN (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Zc3h7b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Zc3h7b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Zc3h7b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RoXaN.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Zc3h7b para la investigación de la señalización de RoXaN, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Zc3h7b críticos para la función de RoXaN
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Zc3h7b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RoXaN CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RoXaN CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Zc3h7b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RoXaN (m) y el plásmido HDR RoXaN (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Zc3h7b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Zc3h7b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.