ROS-GC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404483

Übersicht

GUCY2D kodiert ROS-GC1, eine membrangebundene Rezeptor-Guanylatcyclase, die als Antwort auf intrazelluläre Ca2+-Signale, die durch Guanylatcyclase-aktivierende Proteine vermittelt werden, cGMP synthetisiert. In retinalen Photorezeptoren unterstützt ROS-GC1 Erholung und Adaptation, indem es die cGMP-Spiegel wiederherstellt, die innerhalb der Phototransduktionskaskade die Aktivität zyklisch-nukleotid-gesteuerter Kanäle regulieren. Dieses Enzym verknüpft die Calciumhomöostase mit der Second-Messenger-Signalübertragung, um die Membranerregbarkeit und die synaptische Ausgabe fein abzustimmen. Eine Fehlregulation oder pathogene Varianten in GUCY2D sind mit erblichen Netzhauterkrankungen assoziiert, was das Gen zu einem wichtigen Ziel für mechanistische Studien der cGMP-Signalübertragung und der Funktion sensorischer Neuronen macht.

Das ROS-GC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GUCY2D-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GUCY2D-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GUCY2D nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ROS-GC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GUCY2D-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ROS-GC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GUCY2D-Exone abzielen, die für die ROS-GC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GUCY2D-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ROS-GC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ROS-GC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GUCY2D-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ROS-GC1 HDR-Plasmid (h) und ROS-GC1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GUCY2D-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GUCY2D-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.