Plasmide CRISPR/Cas9 KO ROR2 (m): sc-424100

Présentation

Ror2 code pour le récepteur orphelin 2 de type récepteur tyrosine kinase (ROR2), un récepteur membranaire qui agit principalement comme co-récepteur dans la signalisation WNT non canonique, en particulier en réponse à WNT5A. ROR2 régule la polarité planaire des cellules, la dynamique du cytosquelette et la migration cellulaire dirigée via des voies en aval incluant la signalisation JNK/AP-1 et celle des GTPases de la famille Rho. En biologie du développement chez la souris, l’activité de Ror2 influence la morphogenèse squelettique, l’organisation des membres et l’architecture tissulaire, ce qui en fait un nœud important dans les études de différenciation et de signalisation morphogénétique. Une dérégulation des voies de signalisation associées à ROR2 a été liée à une motilité cellulaire aberrante et à des phénotypes invasifs dans des contextes pertinents pour les maladies, ce qui soutient son utilisation comme levier mécanistique pour interroger des voies et des phénotypes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ROR2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ror2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ror2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ror2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ROR2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ror2 pour l'étude de la signalisation de ROR2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ror2 essentiels à la fonction de ROR2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ror2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ROR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ROR2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ror2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ROR2 plasmide HDR (m) et le ROR2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ror2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ror2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.