ROR1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401841-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ROR1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ROR1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ROR1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ROR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ROR1: sc-130386
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ROR1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401841-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ROR1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401841-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ROR1 (receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1) kodiert einen Single-Pass-Transmembranrezeptor der ROR-Familie, der an der nicht-kanonischen Wnt-Signalübertragung beteiligt ist, einschließlich ligandenabhängiger Antworten auf WNT5A. ROR1 moduliert zelluläre Polarität, Migration, Zytoskelett-Remodelling und Überlebensprogramme über Signalweg-Crosstalk, an dem GTPasen der Rho-Familie, PI3K/AKT, MAPK sowie NF-κB-assoziierte Signalknoten beteiligt sind. Obwohl die Expression während der Entwicklung streng reguliert ist, wurden eine aberrante ROR1-Expression und -Signalgebung in mehreren Krankheitskontexten mit veränderten Differenzierungszuständen und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen ROR1 zu einem nützlichen Ziel, um die Verschaltung des Wnt-Signalwegs, rezeptornahe Signalgebung sowie Mechanismen zu untersuchen, die Motilität und Zellzustandsplastizität steuern.
ROR1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ROR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ROR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ROR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ROR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.