Plasmide Double Nickase (h) ROM-K: sc-404241-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ROM-K correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ROM-K Double Nickase (h) et le plasmide ROM-K Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KCNJ1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ROM-K Antibody (D-3): sc-393189
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ROM-K | sc-404241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ROM-K | sc-404241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ1 code ROM-K (Kir1.1), un canal potassique à rectification entrante qui assure le recyclage du K⁺ à travers la membrane apicale des épithéliums tubulaires rénaux, soutenant la réabsorption du sodium et l’homéostasie potassique. L’activité de ROM-K est couplée aux processus de transport ionique transépithélial dans la branche ascendante large de l’anse de Henle et dans le canal collecteur, en influençant le potentiel de membrane et en fournissant la force motrice du transport électrogénique. Ce canal participe aux voies de gestion rénale des électrolytes, qui croisent des programmes de transport régulés par l’aldostérone ainsi que des réponses cellulaires liées au volume et à l’osmolarité. Un dérèglement ou une perte de fonction de KCNJ1 est associé à des tubulopathies héréditaires avec perte de sel, caractérisées par une altération de la conservation rénale du K⁺ et des déséquilibres acido-basiques, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des troubles du transport ionique.
ROM-K Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNJ1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNJ1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNJ1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNJ1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.