ROM-K Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404241-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ROM-KO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ROM-K (h) e o Plasmídeo Double Nickase ROM-K (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para KCNJ1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ROM-K Anticorpo (D-3): sc-393189
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ROM-K Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ROM-K Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNJ1 codifica o ROM-K (Kir1.1), um canal de potássio retificador para dentro que medeia a reciclagem de K⁺ através da membrana apical do epitélio tubular renal, sustentando a reabsorção de sódio e a homeostase do potássio. A atividade do ROM-K acopla-se a processos de transporte iónico transepitelial no ramo ascendente espesso e no ducto coletor, influenciando o potencial de membrana e impulsionando o transporte eletrogénico. O canal participa em vias de manuseio renal de eletrólitos que se cruzam com programas de transporte regulados pela aldosterona e com respostas celulares de volume/osmóticas. A desregulação ou perda da função de KCNJ1 está associada a tubulopatias hereditárias perdedoras de sal, caracterizadas por conservação renal de K⁺ comprometida e equilíbrio ácido–base alterado, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de distúrbios do transporte iónico.
ROM-K O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KCNJ1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KCNJ1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KCNJ1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KCNJ1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.