RNF31 Lentiviral Activation Particles (h): sc-412436-LAC

Das humane RNF31 kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase, die den katalytischen Kern des Linear Ubiquitin Chain Assembly Complex (LUBAC) bildet und Met1-verknüpfte Ubiquitin-Ketten erzeugt, die die Signalweiterleitung nachgeschaltet von Immunrezeptoren prägen. Über die Regulation von NF-κB und verwandten inflammatorischen Signalnetzwerken beeinflusst RNF31 Zytokinantworten, das Zellüberleben und stressadaptive Transkriptionsprogramme. Die RNF31-abhängige lineare Ubiquitinierung moduliert die Stabilität von Proteinkomplexen an Rezeptor-Signalplattformen und trägt zum Gleichgewicht zwischen pro-survival- und Zelltod-Signalwegen bei. Eine fehlregulierte RNF31-Aktivität und LUBAC-Signalisierung wurden mit aberranter Entzündung sowie onkogenen Signalzuständen in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in der Immunologie, Apoptose- und Krebsbiologie unterstützt.

RNF31 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente RNF31-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

RNF31 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der RNF31-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen RNF31-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen RNF31-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.