Plásmido Doble Nickase (h) RNF123: sc-403631-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RNF123 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RNF123 (h) y el plásmido de doble nickasa RNF123 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RNF123. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RNF123 Anticuerpo (267.1): sc-101122
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RNF123 | sc-403631-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RNF123 | sc-403631-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF123 codifica una ligasa E3 de ubiquitina-proteína que regula el recambio proteico mediante la degradación proteasomal dependiente de ubiquitina y coordina el reconocimiento de sustratos dentro de redes de señalización mediadas por ubiquitina. Al controlar la estabilidad de determinadas proteínas reguladoras, RNF123 influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés celular y vías vinculadas a la proteostasis y la transducción de señales. La alteración de la actividad de las ligasas de ubiquitina puede remodelar programas transcripcionales y el control de los puntos de control, lo que convierte a RNF123 en un nodo relevante para estudios mecanísticos del crecimiento desregulado y la vigilancia del genoma. Se han descrito cambios en la expresión o la función de RNF123 en contextos de biología de enfermedades humanas en los que se ve alterado el control de la homeostasis proteica mediado por la ubiquitinación.
RNF123 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF123 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF123. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF123. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF123 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.