Plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF10 (h): sc-409761

Présentation

RNF10 code une protéine à doigt de zinc de type RING, impliquée dans la régulation, dépendante de l’ubiquitine, de la stabilité des protéines et de la transmission des signaux. Par l’intermédiaire de processus associés à l’activité de ligase E3, RNF10 a été reliée au contrôle de programmes transcriptionnels, de la signalisation médiée par des récepteurs et de voies de protéostasie influençant la croissance et la différenciation cellulaires. Des altérations de l’expression ou de la régulation de RNF10 ont été rapportées dans des contextes relevant de la biologie neuronale et cardiovasculaire, et RNF10 est étudiée pour sa contribution potentielle à une homéostasie cellulaire dérégulée dans les maladies. RNF10 est donc pertinente pour explorer comment le remodelage, médié par l’ubiquitine, des réseaux de signalisation influence l’expression génique et les décisions de destinée cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RNF10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RNF10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RNF10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RNF10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RNF10 pour l'étude de la signalisation de RNF10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RNF10 essentiels à la fonction de RNF10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RNF10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RNF10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RNF10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RNF10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RNF10 plasmide HDR (h) et le RNF10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RNF10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RNF10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.