Plásmido CRISPR de Activación (m) RIP3: sc-425224-ACT

El gen murino **Ripk3** codifica **RIP3**, una quinasa de serina/treonina que actúa como regulador central de la necrosis programada (necroptosis) aguas abajo de las vías de señalización de los receptores de muerte y de la inmunidad innata. Tras su activación, RIP3 forma el necrosoma junto con RIPK1 y fosforila a MLKL para promover la disrupción de la membrana, a la vez que se integra con las respuestas inflamatorias impulsadas por NF-κB y con las vías de estrés metabólico. La señalización dependiente de RIP3 modela la producción de citocinas y el destino de las células inmunitarias en contextos como la infección, la inflamación estéril y la lesión tisular. La actividad desregulada de RIPK3 se ha relacionado con fenotipos inflamatorios y neurodegenerativos, el daño por isquemia-reperfusión y la inflamación asociada a tumores, lo que convierte a **Ripk3** en un nodo clave para estudios mecanísticos sobre la muerte celular y la inmunidad innata.

RIP3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ripk3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RIP3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ripk3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ripk3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RIP3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ripk3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RIP3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RIP3 en células tumorales con expresión de Ripk3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.