RIP140 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401787-ACT

NRIP1 codifica a RIP140, um corregrulador transcricional que modula a expressão gênica ao interagir com receptores nucleares e outros fatores de transcrição que se ligam ao DNA, coordenando programas metabólicos e endócrinos. A RIP140 influencia a adipogênese, a função mitocondrial, a homeostase de lipídios e glicose e a sinalização inflamatória ao moldar a ativação ou repressão dependente de cromatina em promotores-alvo. Por meio de comunicação cruzada com vias como a sinalização do receptor de estrogênio, a transcrição dependente de PPAR e redes mais amplas de coativadores/correpressores, a RIP140 ajuda a integrar sinais nutricionais com a diferenciação celular e respostas ao estresse. A atividade desregulada de NRIP1/RIP140 tem sido associada na literatura a disfunção metabólica, fenótipos reprodutivos e estados transcricionais alterados observados em diversos contextos relevantes para doenças, sustentando seu uso em estudos mecanísticos.

RIP140 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NRIP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RIP140 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NRIP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NRIP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RIP140. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NRIP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RIP140 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RIP140 em células tumorais com expressão de NRIP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.