Plasmide CRISPR/Cas9 KO RINT-1 (h): sc-407428

Présentation

RINT1 code pour RINT-1, une protéine à domaines « coiled-coil » qui contribue à l’homéostasie de l’appareil de Golgi et du réticulum endoplasmique (RE) en soutenant l’ancrage des vésicules et le trafic membranaire entre ces compartiments. RINT-1 participe au maintien d’une organisation correcte de la voie sécrétoire et à la coordination des réponses cellulaires au stress protéotoxique et au stress lié à la réplication, des processus en interaction avec la stabilité du génome et le contrôle du cycle cellulaire. La perturbation du trafic dépendant de RINT1 peut affecter la maturation des protéines et l’intégrité des organites, entraînant des modifications de la signalisation et de l’adaptation au stress. Des études génétiques et fonctionnelles ont associé RINT1 à une susceptibilité au cancer et à d’autres troubles prolifératifs, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes qui couplent le transport intracellulaire aux réponses au stress oncogénique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RINT-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RINT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RINT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RINT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RINT-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RINT1 pour l'étude de la signalisation de RINT-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RINT1 essentiels à la fonction de RINT-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RINT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RINT-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RINT-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RINT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RINT-1 plasmide HDR (h) et le RINT-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RINT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RINT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.