Plásmido Doble Nickase (h) Ring1b: sc-404633-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Ring1b consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Ring1b (h) y el plásmido de doble nickasa Ring1b (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RNF2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RING1B Anticuerpo (N-32): sc-101109
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Ring1b | sc-404633-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Ring1b | sc-404633-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF2 codifica Ring1b, una ligasa E3 de ubiquitina con dominio RING que constituye el núcleo catalítico del complejo represor Polycomb 1 (PRC1). Ring1b monoubiquitina la histona H2A en la lisina 119, reforzando la compactación de la cromatina mediada por Polycomb y la represión transcripcional durante el desarrollo y la especificación de linajes. En coordinación con la metilación de H3K27 dependiente de PRC2 y otros reguladores epigenéticos, RNF2 contribuye a controlar programas del ciclo celular, estados de diferenciación y respuestas al daño del ADN. La actividad desregulada de RNF2 y la señalización de PRC1 se han implicado en redes transcripcionales alteradas observadas en múltiples tipos de cáncer y en otros trastornos relacionados con una desregulación epigenética.
Ring1b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.