Plásmido Doble Nickase (m) Rictor: sc-429705-NIC

Rictor (compañero de mTOR insensible a la rapamicina) es un componente andamiaje esencial del complejo mTOR 2 (mTORC2) en células de ratón, que coordina el ensamblaje y el reclutamiento de sustratos que permiten la fosforilación de quinasas AGC como AKT (Ser473), SGK1 y distintas isoformas de PKC. A través de la señalización de mTORC2, Rictor regula la supervivencia celular, el metabolismo, la organización del citoesqueleto y la migración, integrando señales de factores de crecimiento y del estado nutricional. La actividad alterada de Rictor/mTORC2 se asocia con una señalización de insulina desregulada, fenotipos proliferativos e invasivos aberrantes y la remodelación de respuestas al estrés en diversos contextos relevantes para enfermedades. Estas funciones convierten a Rictor en una diana clave para desentrañar el cableado de la vía PI3K–AKT y los programas transcripcionales y del citoesqueleto aguas abajo en modelos de investigación biomédica.

Rictor El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Rictor en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Rictor. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Rictor. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Rictor alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.