Ribosomal Protein S15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410994-ACT

RPS15 codifica a proteína ribossômica S15, um componente conservado da pequena subunidade ribossômica 40S que contribui para a biogênese dos ribossomos e para a iniciação da tradução ao participar do processamento do pré-rRNA e da decodificação do mRNA. Como parte da maquinaria central de tradução, o RPS15 está ligado a vias que regulam a síntese proteica, o crescimento celular e a regulação da tradução adaptativa ao estresse. Alterações na dosagem de proteínas ribossômicas podem influenciar a função nucleolar e a proteostase, processos frequentemente estudados no contexto do controle proliferativo e das respostas celulares ao estresse. Mudanças na biogênese ribossômica e na produção translacional também são relevantes para ribossomopatias e para pesquisas sobre programas de crescimento desregulados observados em contextos associados ao câncer.

Ribosomal Protein S15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPS15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein S15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPS15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPS15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein S15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPS15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein S15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein S15 em células tumorais com expressão de RPS15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.