RHOBTB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406242

Übersicht

RHOBTB3 kodiert eine atypische GTPase der Rho-Familie mit BTB-Domänen, die als Adapter fungiert und Membrantransport mit ubiquitinabhängigem Proteinabbau verknüpft. RHOBTB3 wird mit der Organisation von Golgi-Apparat und Endosomen, dem Vesikeltransport sowie der Regulation des Zellzyklus in Verbindung gebracht – unter anderem über Interaktionen mit Cullin3-basierten E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexen. Durch seinen Einfluss auf intrazelluläres Trafficking und Proteostase kann RHOBTB3 Signalantworten modulieren, die von Rezeptorrecycling und räumlich begrenzter Aktivität kleiner GTPasen abhängen. Eine Fehlregulation dieser Prozesse wurde in krebsbezogenen Studien mit veränderten Proliferations- und Migrationsphänotypen assoziiert, was die Relevanz von RHOBTB3 für mechanistische Onkologie- und zellbiologische Forschung unterstreicht.

Das RHOBTB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RHOBTB3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RHOBTB3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RHOBTB3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RHOBTB3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RHOBTB3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RHOBTB3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RHOBTB3-Exone abzielen, die für die RHOBTB3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RHOBTB3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RHOBTB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RHOBTB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RHOBTB3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RHOBTB3 HDR-Plasmid (h) und RHOBTB3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RHOBTB3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RHOBTB3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.