RHOBTB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406242

概要

RHOBTB3 は、BTB ドメインをもつ非典型的な Rho ファミリー GTPase をコードしており、膜輸送とユビキチン依存的なタンパク質分解回転を結び付けるアダプターとして機能します。RHOBTB3 は、Cullin3（CUL3）を基盤とする E3 ユビキチンリガーゼ複合体との相互作用を介して、ゴルジ体およびエンドソームの構造維持、小胞輸送、ならびに細胞周期進行の制御に関与すると報告されています。細胞内トラフィッキングとプロテオスタシスに影響を与えることで、RHOBTB3 は受容体リサイクリングや区画化された低分子量 GTPase 活性に依存するシグナル出力を調節し得ます。これらの過程の破綻は、がん関連研究で報告されている増殖や遊走の表現型変化と関連しており、機序解明を目的とした腫瘍学および細胞生物学研究における重要性を支持します。

RHOBTB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRHOBTB3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RHOBTB3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RHOBTB3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RHOBTB3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RHOBTB3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RHOBTB3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RHOBTB3の機能に不可欠なRHOBTB3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RHOBTB3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RHOBTB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRHOBTB3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RHOBTB3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RHOBTB3 HDRプラスミド（h）および RHOBTB3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRHOBTB3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRHOBTB3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。