Rho GAP p190-B Double Nickase Plasmid (h): sc-405755-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rho GAP p190-B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rho GAP p190-B Double-Nickase-Plasmid (h) und Rho GAP p190-B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARHGAP5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rho GAP p190-B: sc-393241
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rho GAP p190-B Double Nickase Plasmid (h) | sc-405755-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rho GAP p190-B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405755-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGAP5 kodiert das Rho-GTPase-aktivierende Protein p190-B, einen zentralen negativen Regulator von Rho-Familien-GTPasen, der die GTP-Hydrolyse beschleunigt und damit RhoA-abhängige Signalwege dämpft. Durch die Modulation der Dynamik des Aktinzytoskeletts, des Turnovers fokaler Adhäsionen und der Kontraktilität beeinflusst p190-B Zellform, Adhäsion, Migration und Zytokinese und integriert dabei Signale aus Integrin- und Wachstumsfaktor-Signalwegen. Die ARHGAP5-Aktivität wirkt sich auf nachgeschaltete Effektoren wie ROCK und die Phosphorylierung der Myosin-Leichtkette aus und verknüpft Rho-Signalisierung mit Mechanotransduktion und Programmen der Zellbeweglichkeit. Eine fehlregulierte Rho-GTPase-Signalisierung unter Beteiligung von ARHGAP5 wird mit verändertem invasivem Verhalten und aberrantem Gewebe-Remodeling bei Krebs sowie anderen Pathologien in Verbindung gebracht, die durch ein Ungleichgewicht des Zytoskeletts gekennzeichnet sind.
Rho GAP p190-B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARHGAP5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARHGAP5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARHGAP5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARHGAP5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.